《一日夫妻百日恩》的故事從男主角羅列(郭曉冬飾演)向女主角簡小菲(趙子琪飾演)跪搓衣板求婚講起，講述這一對剛剛步入婚姻殿堂的年輕人，結婚一年間所遇到的一系列情感問題。郭曉冬、趙子琪這對小夫妻的情感主線之中，還穿插著簡小菲父(韓童生飾演)母(劉莉莉飾演)、羅列父(孔祥玉飾演)母(張瑛飾演)的感情婚姻糾葛。
相戀多年的醫生羅列（郭曉冬 飾）和美麗的公司白領簡小菲（趙子琪 飾）終於走進婚姻殿堂，但是小菲的父母簡正（韓童生 飾）和夏明媚（劉莉莉 飾）卻隨即結束了名存實亡的婚姻，如此迅速的悲喜變故令小菲非常痛苦。不久，意外的懷孕又向這對小夫妻伊始的幸福生活上潑了一桶涼水。羅列因此導致了一起醫療事故，心灰意冷的他決定辭職，轉而經營影樓。心懷愧疚的小菲從男性好友林威（林繼東 飾）那裏借錢資助丈夫，可是謠言卻將一樁美事引向全然相反的方向。
似乎受到父輩婚姻的影響，羅列和小菲的婚姻剛剛開始，便已走向了死亡的墳墓……