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紐約自然博物館重新開張,小保安賴瑞·戴利(本·斯蒂勒 Ben Stiller 飾)帶領泰迪·羅斯福(羅賓·威廉姆斯 Robin Williams 飾)策劃了精彩的開幕演出。誰知演出剛剛沒多久,泰迪、猴子他們便陷入混亂,所有博物館的夥伴們大鬧會場,賴瑞為此焦頭爛額。事後他發現,復活黃金碑正被綠色的物質腐蝕,而這種情況似乎導致了藏品們的瘋狂。賴瑞查找資料,斷定黃金碑背後隱藏著不為人知的秘密。為了組織混亂情況的蔓延,他決定前往大英博物館求助法老王阿卡曼拉的父親,當然那堆搞怪的藏品也都尾隨而至。途中他們遇見了圓桌騎士蘭斯洛特爵士,還和屋大維等夥伴走散。 久違的奇妙冒險,就在夜幕下的大英博物館的展開……